Imunoelektroforéza

Imunoelektroforéza se používá k laboratorní diagnostické detekci monoklonálních protilátek v krvi pacienta. Monoklonální protilátky jsou odvozeny ze stejné buňky a jsou namířeny proti stejným antigenům. Z tohoto důvodu je třeba je hodnotit jako patologický a, pokud se prokáže, hovořit o chorobách, jako je Waldenströmova choroba.

Co je imunoelektroforéza?

Iony mají různou pohyblivost. Tato různá mobilita tvoří základ elektroferézního postupu. Tyto metody oddělují různé látky od sebe pomocí elektrického pole a gravitace. Známou metodou v oboru je imunoelektroforéza.

Jedná se o kvalitativní diagnostickou metodu, která se používá k detekci monoklonálních protilátek. Protilátky jsou imunologicky aktivní proteinové látky ze specifické buněčné linie. Monoklonální protilátky jsou založeny na stejných B lymfocytech, a proto jsou namířeny proti jedinému epitopu. Každá přirozená imunitní odpověď na napadající antigeny odpovídá polyklonální odpovědi, a proto je namířena proti různým epitopům. Monoklonální imunitní reakce proto poskytuje indikace patologických tělesných procesů.

Monoklonální protilátky vážou různé molekuly s vysokou specificitou. Tuto vazbu lze prokázat imunoelektroforézou. Procedura je kvalitativní procedura v laboratorní diagnostice a skládá se ze dvou typů procedur, elektroforézy v séru a imunodifúze.

Funkce, účinek a cíle

Imunoelektroforéza kombinuje metodiku elektroforézy séra s imunodifúzí. Sérum pacienta je umístěno na agarózový gel nebo film z acetátu celulózy. Aplikuje se také kontrolní sérum. Po aplikaci následuje elektroforetická separace vzorků. Mezi dělicí čáry se používají antiséra, IgG, IgA, IgM, kyselina octová pro normální elektroforézu a kappa a lambda.

To vytváří reakci s protilátkami v pacientově séru, což vytváří linie srážení. V závislosti na použitém antiséru a poloze a tvaru jednotlivých linií lze vyvodit závěry o imunoglobulinech obsažených v lehkých řetězcích kappa nebo lambda. V případě lambda pruhu existují volné lehké řetězce tvořené protilátkami. Laboratoř poskytuje další důkaz prostřednictvím vzácných IgE a IgD, což umožňuje přesné stanovení imunoglobulinů. Metoda imunodifúzní elektroforézy probíhá podle Pierra Grabara a Curtisa Williamsa a odpovídá kombinaci elektroforézy proteinů a difúze protilátek na agarózovém gelu.

Nejprve proběhne elektroforéza na agarózovém gelu. Následně obsažené protilátky difundují proti proužkům antigenů a tím vytvářejí sraženiny. To je třeba odlišit od imunoelektroforézy raket podle Laurella, která odpovídá elektroforéze proteinů v agarózovém gelu, z nichž každá má protilátky v určité koncentraci. V gelu je slabě bazický pufr, který umožňuje migraci antigenů a který většinu protilátek do izoelektrického bodu nutí vystavením mírně bazické hodnotě pH, dokud se elektroforeticky přestanou pohybovat.

Na začátku raketové imunoelektroforézy je nadbytek antigenu, takže se tvoří rozpustné komplexy antigen-protilátka. Během elektroforézy dochází také k vazbě mezi antigeny a dalšími protilátkami. Tímto způsobem se vytvoří imunoprecipitáty v bodě ekvivalence, které se podobají raketovým číslům s výškou úměrnou koncentraci antigenu. Pro vyhodnocení testu se měří výška sraženiny.

Zde najdete své léky

Rizika, vedlejší účinky a nebezpečí

Detekce monoklonálních protilátek má zvláštní význam pro diagnostiku mnohočetného myelomu a Waldenströmovy choroby. Poskytnuté důkazy hovoří o maligní degeneraci imunitních buněk. Mnohočetný myelom odpovídá rakovině v kostní dřeni, která se vyznačuje maligním množením buněk produkujících protilátky v plazmě.

Tyto plazmatické buňky produkují protilátky a jejich fragmenty. Maligní plazmové buňky vždy pocházejí z běžné prekurzorové buňky, a jsou proto geneticky totožné. Produkují pouze monoklonální protilátky. Malignita tohoto onemocnění může odpovídat prekanceróznímu stádiu, ale může také dosáhnout vysoce maligního stádia, které bez léčby je rychle fatální. Příznaky onemocnění vyplývají z maligního růstu buněk nebo protilátek a fragmentů protilátek. Mezi nejčastější příznaky patří bolest kostí, rozpuštění kostí a spontánní zlomeniny.

Hladina vápníku v krvi se často zvyšuje. Kromě toho jsou abnormální protilátky často ukládány v tkáni a způsobují funkční poruchy v orgánech, které mohou vést k příznakům, jako je selhání ledvin nebo zhoršený průtok krve. Waldströmova nemoc je také maligní nádorové onemocnění. Přesněji řečeno je to maligní lymfomová choroba, která se počítá mezi pomalu postupující a téměř asymptomatické B-buněčné non-Hodgkinské lymfomy. Ve většině případů může být při onemocnění detekována abnormální produkce monoklonálních IgM v důsledku aktivity maligních lymfomových buněk.

Waldenströmova nemoc je svými vlastnostmi velmi podobná mnohočetnému myelomu, ale obvykle vykazuje příznivější průběh. Většina pacientů s Waldenströmovou chorobou je do doby, kdy jsou diagnostikována, do velké míry asymptomatická. Jiní pacienti vykazují příznaky brzy, jako je nespecifická únava nebo periferní neuropatie, které jsou způsobeny ukládáním monoklonální IgM do myelinového pochvy. Polyneuropatii může vyvolat i malá množství IgM. U jiných pacientů nedochází k polyneuropatii, a to ani na vysokých hladinách. Kromě toho se mohou objevit nespecifické příznaky, jako je horečka, nežádoucí hubnutí nebo noční pocení. Charakteristická je také bolest kostí.

Kvůli nadprodukci IgM se z krve stává hyperviskus, takže uvedené příznaky mohou být spojeny se symptomy hyperviskózního syndromu. Ve většině případů se tato tendence ke krvácení projevuje častými bolestmi hlavy, bolestmi hlavy, neklidem nebo rozmazaným viděním a akustickými potížemi. Pro detekci zhoubných onemocnění tohoto typu se imunoelektroferéza stala standardním diagnostickým postupem.