Přímá imunofluorescenční detekce

Důkaz tkáňových struktur, protilátek a patogenů prostřednictvím imunitního značení je populární, moderní a přesný. Imunofluorescence označuje imunitní značení připravenými fluorescenčními protilátkami, které jsou vyrobeny tak, aby zářily pod UV světlem.

Na Přímá imunofluorescenční detekce substrát je zkoumán přímo pomocí světelných protilátek, bez primárních protilátek nebo umělých antigenů.

Co je přímá imunofluorescenční detekce?

Přímá imunofluorescenční detekce je diagnostická metoda založená na znalostech imunologie, imunostainování a imunohistochemie. Zde je kladen důraz na schopnost protilátek vázat se na specifické body tkáně nebo na antigeny v séru. Tato místa jsou epitopy.

V biochemické diagnostice existují umělé protilátky nebo mimetika (singulární: mimetická), které umožňují, aby tyto vazby protilátka-antigen byly označeny fluorescencí nebo radioaktivitou. Umělé protilátkové konjugáty se na jedné straně vážou k epitopům a na druhé straně mají fluorescenční marker v případě imunofluorescence. Toto je alternativa k použití radioaktivních markerů. Zvláštností přímé imunofluorescenční detekce ve srovnání s nepřímou detekcí je to, že protilátka, která se váže na epitop antigenu ve zkoumaném materiálu, také představuje protilátkový konjugát s fluorescenčním markerem. Pro přímou detekci nejsou nutné další protilátky.

Fluorescein, který svítí pod UV světlem, a fluorescein isothiokyanát (FITC) se používají jako barviva pro výrobu umělých protilátkových konjugátů v imunofluorescenci. Zatím to vypadá trochu komplikovaně, ale přímá imunofluorescenční detekce je standardní lékařskou laboratorní diagnostickou metodou pro celou řadu lékařských otázek. Protilátky s fluorescenčním barvivem jsou připraveny k prodeji.

Funkce, účinek a cíle

Pro tkáňové vyšetření je k dispozici přímá detekce imunofluorescence pro barvení určitých struktur v tkáni. Jsou však také k dispozici pro jednotlivé buňky. Hlavní roli zde hraje průtoková cytometrie. Konečně, existují imunotesty na tuhé a kapalné fázi. Imunofluorescenční vyšetření tkání je zvláště důležité v onkologii, tj. Při lékařské léčbě rakovinových onemocnění.

Antigeny nádoru specifické v nádorové tkáni mohou být detekovány přímo pomocí imunofluorescence. Tato vyšetření na vzorcích tkání z nádorů jsou často důležitá proto, aby se zjistilo, odkud stávající metastázy pocházejí z těla, nebo aby bylo možné posoudit, zda je nádor benigní nebo maligní. Vyšetření jednotlivých buněk s přímou imunofluorescenční detekcí se používá k nalezení virových antigenů, bakteriálních antigenů a dalších epitopů.

Můžete například zjistit, zda jsou buňky infikovány virem a v jaké fázi cyklu infekce jsou buňky. Název FACS (= Fluorescence-Activated Cell Sorting) je vysoce efektivní metoda průtokové cytometrie, při které jsou buňky označené fluorescencí distribuovány do různých zkumavek v závislosti na typu barvy. Tento postup je důležitý v imunologii, hematologii a infekčních chorobách.

Imunofluorescenční imunotesty umožňují přímou detekci environmentálních toxinů, geneticky modifikovaných organismů a určitých přísad v potravinách. V tomto experimentálním uspořádání vždy existuje pevná a kapalná fáze. Přímo lze také detekovat řadu patogenů, včetně viru HIV, který způsobuje AIDS. Při detekci infekčních a autoimunitních onemocnění je však často záležitostí detekce protilátek než antigenů. Jedná se o obranné molekuly tvořené imunitním systémem těla. Podle zde uvedené definice tedy takové důkazy nejsou přímými důkazy, protože fluorescenční protilátky se nespojují přímo s vlastními antigeny těla, ale s antigeny testovacího uspořádání.

Tyto antigeny v experimentálním uspořádání jsou zase spojeny s vlastními protilátkami těla. Přímá detekce imunofluorescence u běžných infekcí, například virů HIV a chlamydií, se používá pouze ve speciálních detekčních a potvrzovacích testech. Existují testy na mnoho dalších nemocí. Ve většině situací je nepřímá detekce protilátek vhodnější pro infekční onemocnění, protože vlastní imunitní systém těla má geniální schopnost zapamatovat si předchozí infekce. V jiných situacích se přímá detekce antigenů a nepřímá detekce protilátek vzájemně doplňují. Posledně uvedené ukazují, že k infekci došlo dříve, zatímco první poskytuje přesnější informace o současném stavu aktivity patogenu.

Zde najdete své léky

Rizika, vedlejší účinky a nebezpečí

Při přímé detekci imunofluorescence, stejně jako u všech lékařských důkazů, existují dvě rizika: riziko falešného pozitivního výsledku a riziko falešného negativního výsledku. Falešné, pozitivní výsledky způsobují psychické nepohodlí a velký stres pro pacienta.

Proto jsou k pozitivním výsledkům přidány další zkušební postupy, zejména pokud diagnóza vede k drastickým změnám života. Riziko falešného negativního výsledku spočívá v tom, že se pacient včas nenaučí ohrožení svého vlastního zdraví a možná i veřejného zdraví. Proto je dobré udělat hodně výzkumu a provést a nabídnout velké množství různých imunofluorescenčních přímých detekcí připravených k prodeji. Spolu s dalšími přímými a nepřímými metodami detekce nemocí a patologií to zvyšuje přesnost diagnostiky.

Přímá detekce je založena na protilátkovém konjugátu, který se na jedné straně váže na epitopy antigenů a na druhé straně také způsobuje fluorescenci. Takový produkt se proto používá pouze v jednom typu zkušebního postupu a nepoužívá se pro jiné typy zkušebního postupu.Toto je důležitý procedurální rozdíl k nepřímému důkazu, ve kterém fluorescenčním protilátkám předchází primární protilátka pro vazbu epitopu. Protilátkový konjugát je proto vhodný pro různé testy. Tento procedurální rozdíl se liší od lékařského rozdílu mezi nepřímou detekcí protilátek a přímou detekcí antigenů.